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Elisa實驗:ELISA試劑盒標準操作流程
更新時間:2025-08-01瀏覽:82次

  Elisa實驗:ELISA試劑盒標準操作流程

  一、實驗前準備

  試劑平衡?

  從2-8℃取出試劑盒,所有組分(包括酶標板、標準品、檢測抗體等)需室溫平衡30分鐘,避免冷凝水干擾?。

  濃縮洗滌液若有結晶,需37℃水浴至溶解?。

  耗材檢查?

  核對試劑盒組分與說明書是否一致,確認酶標板無破損、污染?。

  未使用的板條需密封后冷藏保存?。

  二、標準品與樣本處理

  標準品稀釋?

  凍干標準品需離心后加指定體積稀釋液溶解,渦旋混勻?。

  梯度稀釋建議使用1.5mL EP管,按2倍比例逐級稀釋(如S7→S0),每步需換槍頭并充分混勻?。

  樣本預處理?

  細胞上清需3000rpm離心10分鐘去除雜質?。

  高濃度樣本需按說明書稀釋(如5倍)?。

  三、加樣與孵育

  孔位布局?

  設置標準品孔(梯度濃度)、樣本孔(建議復孔)、空白孔(僅加稀釋液)?。

  加樣體積通常為50-100μL,槍頭需懸空垂直加液,避免觸碰孔壁?。

  孵育條件?

  加入檢測抗體后,37℃避光孵育1-2小時,震蕩(300rpm)可提高結合效率?。

  四、洗滌與顯色

  洗板規(guī)范?

  手工洗板:每孔加滿洗滌液,靜置1分鐘后甩干,重復3-5次,最后拍干?。

  自動洗板機建議設置30秒浸泡程序?。

  顯色控制?

  底物(如TMB)需避光操作,37℃孵育15-30分鐘,顯色至孔內液體變藍?。

  終止液加入后5分鐘內需完成讀數(shù)(顏色變黃)?。

  五、數(shù)據(jù)讀取與分析

  酶標儀設置?

  雙波長檢測(主波長450nm,參考波長630nm),避免孔間干擾?。

  標準曲線擬合?

  使用CurveExpert或Excel擬合4參數(shù)曲線,計算樣本濃度?。

  六、注意事項

  關鍵控制點?:

  避免酶標板長時間暴露于室溫,孵育時需密封?。

  不同批次試劑不可混用,HRP工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用?。

  異常處理?:

  顯色過淺:檢查孵育時間或底物活性?。

  背景過高:洗滌不充分或抗體濃度過高?。

  (注:具體操作需以試劑盒說明書為準,不同品牌可能存在細節(jié)差異?。)

  BS-1502人內皮脂肪酶(EL)ELISA試劑盒

  BS-2489小鼠內皮脂肪酶(EL)ELISA試劑盒

  BS-3364大鼠內皮脂肪酶(EL)ELISA試劑盒

  注:以上資料僅供參考,不作為實驗數(shù)據(jù),具體請咨詢品牌供應商或技術老師;

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