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做免疫組化和WB一般采用二抗顯色,為什么不直接用標記物標記一抗呢?
更新時間:2025-08-13瀏覽:63次


  做免疫組化和WB一般采用二抗顯色,為什么不直接用標記物標記一抗呢?

  以下是免疫組化(IHC)和Western Blot(WB)中采用二抗顯色而非直接標記一抗的核心原因分析:

  一、信號放大效應(yīng)?

  級聯(lián)放大作用?

  單個一抗可結(jié)合多個二抗(如HRP標記二抗),顯著增強檢測信號

  直接標記一抗僅能產(chǎn)生1:1信號,靈敏度降低10-100倍

  經(jīng)濟性考慮?

  同一物種來源的一抗可共用一種標記二抗(如兔源一抗+抗兔HRP二抗),減少標記成本


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  二、實驗靈活性優(yōu)勢?

  對比項? ?直接標記一抗? ?二抗顯色系統(tǒng)?

  抗體復(fù)用性? 每種一抗需單獨標記,成本高 同一二抗適配多種一抗

  多重檢測? 難以實現(xiàn)多色標記 可通過不同熒光二抗同時檢測多個靶點

  三、技術(shù)局限性?

  標記影響結(jié)合活性?

  熒光/酶標記可能遮蔽一抗的抗原結(jié)合位點,降低特異性

  二抗通過Fc段結(jié)合,不影響一抗的Fab段功能

  背景控制難度?

  直接標記一抗需更高純度(>95%),否則非特異結(jié)合導(dǎo)致高背景

  二抗系統(tǒng)可通過封閉步驟(如BSA封閉)有效降低背景

  四、特殊應(yīng)用場景例外?

  流式細胞術(shù)?:常使用直標一抗(如FITC-CD4),因需快速檢測且樣本量少

  快速檢測試紙?:部分采用金標一抗,犧牲靈敏度換取操作簡便性

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